本发明公开了一种人胎盘、脐带间充质干细胞库及其构建方法，本发明的构建步骤包括：(1)取人胎盘、脐带进行检测，用磷酸缓冲液冲洗涤后粉碎，加磷酸缓冲液稀释；(2)加入胶原酶消化；(3)加入磷酸缓冲液稀释；(4)加入胰酶消化；(5)将步骤(2)及步骤(4)所获得的细胞混合，离心，弃去上清液，用磷酸缓冲液洗涤，再离心，弃去上清液，即获得间充质干细胞；(6)将间充质干细胞置液氮冷冻，按其ABO/Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人胎盘、脐带间充质干细胞库。本发明为新生儿储存胎盘及脐带间充质干细胞，为其本人、家属和他人提供间充质干细胞治疗疾病及其他应用。