pET15b－PEP－1－Cat质粒及构建、PEP－1－...
专利权的终止
摘要
本发明提出了可以以天然活性形式穿透细胞的pET15b－PEP－1－Cat质粒的构建及PEP－1－CAT融合蛋白的表达纯化方法。具体如下：设计并合成两端分别带Sal I和Bgl II酶切位点的Cat引物，用PCR方法以pZeoSV2(+)－Cat质粒为模板，特异性扩增Cat全长cDNA；将扩增的Cat cDNA与dATP反应，利用Taq DNA聚合酶在CAT cDNA的3’末端加“A”并纯化，然后应用TA克隆将Cat cDNA插入至中间载体pGEM－T Easy Vector中得到pGEM－T－Cat；人工合成编码PEP－1的双链寡核苷酸，两端分别引入Nde I和Xho I酶切位点，将其插入pET15b中得到重组质粒pET15b－PEP－1。pGEM－T－CAT和pET15b－PEP－1分别经Sal I－Bgl II和Xho I－BamH I双酶切，将回收得到的Cat cDNA片段与pET15b－PEP－1相连，构建出质粒pET15b－PEP－1－Cat。融合蛋白的表达纯化如下：用质粒pET15b－PEP－1－Cat转化感受态BL21(DE3)大肠杆菌，然后在培养基中发酵；发酵结束，用冰浴超声破
基本信息
专利标题 ：
pET15b－PEP－1－Cat质粒及构建、PEP－1－CAT融合蛋白及表达
专利标题（英）：
暂无
公开（公告）号 ：
CN1974774A
申请号 ：
CN200510019900.1
公开（公告）日 ：
2007-06-06
申请日 ：
2005-11-24
授权号 ：
暂无
授权日 ：
暂无
发明人 ：
王家宁
申请人 ：
王家宁
申请人地址 ：
442000湖北省十堰市朝阳中路23号十堰市人民医院临床医学研究所
代理机构 ：
十堰博迪专利事务所
代理人 ：
张秀英
优先权 ：
CN200510019900.1
主分类号 ：
C12N15/63
IPC分类号 ：
C12N15/63 C12N15/62 C12N15/53 C12N15/70 C12N1/21 C07K19/00 C07K1/14
IPC结构图谱
C
C部——化学；冶金
C12
生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程
C12N
微生物或酶；其组合物；繁殖、保藏或维持微生物；变异或遗传工程；培养基。
C12N15/00
突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体或其分离、制备或纯化；所使用的宿主
C12N15/09
DNA重组技术
C12N15/63
使用载体引入外来遗传物质；载体；其宿主的使用；表达的调节
法律状态
2012-02-08 ：
专利权的终止
未缴年费专利权终止号牌文件序号 : 101180311295
IPC(主分类) : C12N 15/63
专利号 : ZL2005100199001
申请日 : 20051124
授权公告日 : 20090121
终止日期 : 20101124
号牌文件类型代码 : 1605
IPC(主分类) : C12N 15/63
专利号 : ZL2005100199001
申请日 : 20051124
授权公告日 : 20090121
终止日期 : 20101124
号牌文件类型代码 : 1605
2009-01-21 ：
授权
2007-08-01 ：
实质审查的生效
2007-06-06 ：
公开
注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
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