本发明抗－HBeAg单克隆抗体细胞株、制备方法和抗－HBeAg单抗涉及病毒免疫学检测技术领域。本发明的目的是解决现有技术中存在的缺乏识别HBeAg不同表位的单抗及难于制备识别HBeAg优势表位之外的抗原表位的单抗的技术缺陷。本发明公开了两株产生抗－HBeAg单抗的杂交瘤细胞株，通过免疫动物前预先注射HBeAg和/或免疫前将HBeAg和ewb反应后再免疫动物获得了识别b表位之外的抗原表位的单抗，并公开了两种抗－HBeAg单抗。本发明的抗体具有很好的特异性和亲和性，并识别不同的表位，可以分别与ewb配合或本发明的抗体相互配合用于双抗体夹心法ELISA检测HBeAg。