本发明公开的一种生物体液中丹酚酸B浓度测定样品的预处理方法，其特征在于：将含有丹酚酸B浓度的生物样品加入用甲醇和水活化后的Waters Oasis HLB小柱，经淋洗和洗脱后，洗脱液挥干富集，用1％三氟乙酸∶甲醇∶乙腈流动相复溶后即可用高效液相色谱法进行检测；其中淋洗条件为：水和甲醇，洗脱条件为：氨水甲醇。本发明采用固相萃取技术对含有丹酚酸B浓度的生物样品进行预处理，处理的含有丹酚酸B浓度的生物样品，比现有的方法处理的含有丹酚酸B浓度的生物样品，其丹酚酸B浓度的最低定量限低300多倍，灵敏度明显提高；符合生物样品分析的要求，可灵敏地测定生物体液中丹酚酸B浓度，适合用于丹酚酸B药代动力学研究。