本发明公开了一种从禽畜胆汁中生产高纯度鹅去氧胆酸的方法，属于精细化工和医药领域。该方法包括如下步骤：a.皂化反应：将禽畜胆汁与氢氧化钠溶液按一定比例及温度下进行皂化反应，反应时间为20－30小时；b.中和反应：皂化反应结束后加入稀盐酸调节至酸性，然后过滤得到粗胆酸；c.柱层析：将粗胆酸用稀氢氧化钠溶液调至碱性，打入层析柱中，用碱性溶液洗脱，合并经薄层层析检测为单纯的鹅去氧胆酸斑点的洗脱液；d.超滤：用截留分子量为3K－100K的超滤膜超滤；e.超滤液用稀酸调至酸性，过滤，烘干，得纯度为96％以上的鹅去氧胆酸。本发明生产工艺简单、产品纯度高、成本低、绿色环保。