奶牛结核病的快速检测方法及特异性单克隆抗体BovIFN－γ－4A3、BovIFN－γ－4G5的构建方法，涉及奶牛结核病的检测技术领域。用重组菌诱导表达的融合蛋白GST－BovIFN－γ免疫Balb/c小鼠，通过杂交瘤技术研制出抗BovIFN－γ的单克隆抗体，即获得特异性单克隆抗体BovIFN－γ－4A3和BovIFN－γ－4G5。单抗BovIFN－γ－4A3属于IgG2b亚类，单抗BovIFN－γ－4G5属于IgM亚类，能特异性识别BovIFN－γ。本发明在制备了rBovIFN－γ的基础上，研制出抗BovIFN－γ的单克隆抗体，以单克隆抗体为基础建立快速检测病牛血细胞分泌的IFN－γ量，从而判断奶牛的结核病感染情况。该方法检测步骤简单、敏感性高、快速，整个检测过程只需4小时。