本发明属于医学免疫诊断技术领域，涉及基于组合蛋白的结核分枝杆菌金标诊断试剂，采用结核分枝杆菌主要分泌蛋白ESAT6、MPT64、PstS－1、Ag85B的B细胞抗原决定簇重新组合为一组蛋白作抗原，作为结核病的临床血清学诊断的特异性地检测抗体。本发明将结核分枝杆菌主要分泌蛋白的B细胞抗原决定簇基因进行组合并通过基因工程手段表达、纯化得到一个新蛋白，通过金标渗滤法检测结核病人血清。本发明灵敏度高，操作简单，检测快速、省时，特异性强，能区分是因为接种卡介苗、以及与环境中多种非结核分枝杆菌接触而造成的致敏还是真正的结核分枝杆菌感染，可广泛用于临床结核病的临床血清学诊断。