本发明公开了一种采用液——液——液三相静态萃取高效液相色谱鉴别阿胶的方法。即采用三种不同极性和不同比重的溶剂，以非极性溶剂为轻相、极性溶剂为中间相(将阿胶预先溶于该相)、弱极性溶剂为重相组成三相萃取体系，在静态下对阿胶进行萃取，相分离后制成三种极性萃取物供试液并对三种供试液分别以不同的流动相梯度，按照高效液相色谱法测定，记录色谱图和三维谱图。对黄明胶、杂皮胶采用与阿胶相同的方法进行实验。通过对三种胶在相同条件下测定的同相萃取物HPLC图谱进行对比分析。该法鉴别阿胶，检测灵敏度高，分离度、对称性、重现性好，鉴别特征明显，能够准确鉴别阿胶真伪并有效控制其内在质量。