本发明公开了一种血管内皮生长因子时间分辨荧光免疫分析方法及试剂盒，其选用抗血管内皮生长因子单克隆抗体JH121作为包被抗体，用缓冲液稀释至1～10mg/L作为包被液；选用镧系元素离子标记的抗血管内皮生长因子单克隆抗体5C3.F8作为标记抗体，用反应缓冲液以体积比为1∶25～100稀释；在包被抗体的反应板上，每孔依次加入体积比为1∶3～8的血管内皮生长因子标准品或待测样品、以及稀释的标记抗体，采用平衡法进行荧光检测。本发明还提供了相应的试剂盒。本发明具有较高的灵敏度、特异度及稳定性；且分析系统高度自动化，可提高临床检验结果的速度，又可大幅度降低人为误差和增加检出结果的可靠性。