本发明公开了一种翅果油树试管苗的繁殖方法。该方法包括以下步骤：1)以无菌种子苗的茎段、根段、子叶切段为外植体诱导愈伤组织；2)将愈伤组织置于预分化培养基上进行预分化；3)将步骤2)经预分化培养的愈伤组织置于分化培养基上进行不定芽的分化；4)将步骤3)长出不定芽原基的愈伤组织置于芽伸长培养基上促进芽的生长；5)对步骤4)获得的小苗用吲哚丁酸溶液浸泡法或微型扦插法进行生根培养。该方法简便快速、成本低廉，可在较短的时间内获得大量的翅果油树再生植株，具有商业生产的可行性。本发明为翅果油树的快速繁殖和该植物的保护性研究提供了理论和实践基础，也为进一步开展翅果油树的遗传转化、遗传改良和分子生物学研究奠定了坚实的基础。