一种利用亲水/疏水复合膜中的微结构固定化脂肪酶的方法，属于生物工程中的酶固定化领域。本发明先将亲水性膜材料醋酸纤维素溶解在二甲基甲酰胺中，制成亲水性膜液，再将疏水性聚四氟乙烯膜平铺在玻璃板上，将亲水性膜液刮涂在其表面，利用干－湿相转换法制备得到由致密亲水层和多孔疏水层组成的复合膜，并通过过滤的方法，利用其微结构实现脂肪酶的固定化。本发明与现有的脂肪酶膜固定化方法相比，具有以下优点：利用物理的方法实现了脂肪酶的固定化，方法简单，成本低；脂肪酶在固定化过程中活力损失小，制备得到的固定化脂肪酶膜活力及其活力回收率高；酶的负载量容易控制；固定化酶膜的使用稳定性较好；载体可以再生重复使用，降低了成本。