利用蛋白质组学技术筛选强心苷药物作用靶位的方法，属于医药技术领域。包括：心肌细胞培养及强心苷药物对心肌细胞作用模型的建立，制备心肌细胞二维电泳蛋白质样品，双向凝胶电泳，图像采集分析，获得强心苷药物作用于心肌细胞的差异表达蛋白质，差异蛋白质经胶内酶切后，运用质谱，测定差异蛋白肽质量指纹图谱；进入序列数据库，对差异蛋白质进行鉴别和分析，并推导出其DNA序列。对特征蛋白进行质谱分析，通过与质谱库比较，筛选出差异蛋白；验证差异表达蛋白的生物学功能。用蛋白质组学技术筛选强心苷药物抗心力衰竭的药物作用靶位，可直接用于指导研发新型高效低毒的抗心力衰竭药物。