本发明公开了一种分离细胞的方法及专用细胞分离液。该专用细胞分离液，是向常规细胞分离液中添加表面活性剂后得到的试剂。分离细胞的方法，包括以下步骤：1)按照一定体积比将表面活性剂与现行细胞分离液混合，离心，得到专用细胞分离液；2)将待分离细胞样品直接加入步骤1)经离心后的专用细胞分离液中，离心：3)收集云雾层中的细胞，洗涤，得到纯净细胞。本发明大大缩短加样与细胞分离时间，简便了操作规程，适合于大规模的细胞分离，效果稳定、可靠，可以得到高纯度的目的细胞。该细胞分离方法简单，可操作性强。本发明在细胞生物学、功能基因组学以及细胞工程等领域，具有较高的实际应用价值，市场前景广阔。