一种由周期性任意波形激发测量荧光寿命的方法，为了克服现有测量方法测量荧光寿命的困难，以测量发射波形相对于激发波形的相位延迟计算得到荧光寿命的相移法为基础，采用具有一定调制度和频率可调谐的激发光源激励荧光样品。由计算机分别对激发波形和发射波形进行傅利叶级数展开，只需提取基频分量间的相位延迟，就可以根据相位延迟和荧光寿命的关系计算得到准确荧光寿命值，从而避开了激发波形中含有的高次谐波对实验结果的影响，提高了测量荧光寿命的准确度。解决了目前相移法必须依靠高简谐度激发波形等问题。提供一种由周期性任意波形激发光源就可以测量荧光寿命的方法，提高准确度外还降低了对激发光源驱动电路的要求。