本发明公开了一种硬组织低温包埋冷凝酯的制备方法，其步骤是首先对骨组织用金刚沙片切锯成1～2cm的厚度，后放入固定液中，保存；其次是冲洗好的样品进行酒精梯度脱水；第三是脱水完成后，放入渗透中间液，后放入渗透液，间歇抽真空；第四是将渗透好的组织放入包埋瓶中，加入新鲜包埋液，放入冰箱中聚合；第五是聚合完成后，破碎包埋瓶，取出包埋块，在硬组织切片机上进行切片，切片附于载玻片上，干燥；第六是染色处理。本发明简单易行，抗原和酶活性保存完好，冷凝酯渗透好，聚合后硬度高，易于切片，后期容易脱掉，染色后效果好。