本发明公开一种抗乙型肝炎病毒微小核糖核酸干扰分子，其特征是：具有基因靶向灭活作用的2个分别作用于HBV的X蛋白基因和外壳蛋白基因的双链DNA寡核苷酸，其中作用于HBV X蛋白和外壳蛋白的抗HBV mi RNAi分别具有序列表中序列－1和序列－2所示的DNA序列结构，其作用靶点分别具有序列表中序列－3和序列－4所示的DNA序列结构。公开的抗HBV mi RNAi设计方法包括筛选HBV基因的保守序列和采用invitrogen网站提供的在线RNAi设计软件针对HBV保守序列设计抗HBV miR RNAi两个步骤，还公开了序列表中序列－5和序列－6所示的HBV X蛋白和外壳蛋白基因上的保守序列。为进一步的抗HBV药物研究提供了很好的研发平台。