本发明涉及一种葛根素羟基化的微生物转化方法。本发明采用分离及保藏的具有葛根素羟基化酶活力的微生物菌种接种到培养液中，进行发酵培养；发酵结束后，将发酵液与菌丝体分离；所获菌丝体作为静息细胞，加入到含有葛根素的转化液中，使葛根素转化为羟基葛根素；转化结束后，去除菌丝体，上清液经浓缩、低温干燥处理后，可得3′－羟基葛根素固体；或将转化液的上清液用有机溶剂萃取，再用水从有机相中反萃取，获得的水相萃取液经浓缩、硅胶层析分离，可得到含3′－羟基葛根素的溶液，再将含3′－羟基葛根素的溶液经浓缩、或低温处理后，可得到3′－羟基葛根素粉末或晶体。