一种磷脂改性腈纶纳米纤维复合膜及其制备和用于固定化酶的方法。它以丙烯腈/2－甲基丙烯酰氧－乙基－磷脂酰胆碱共聚物为原料，以二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲乙酰胺为溶剂，将含有磷脂基团的丙烯腈共聚物通过静电纺丝法制备而成，并以其作为酶固定化的载体，通过物理吸附的方法将酶固定到纳米纤维复合膜上。本发明利用纳米纤维复合膜的高比表面积、高空隙率以及磷脂独特的仿生特性，可以得到具有高载酶量、高比活、高催化效率固定化酶的磷脂改性腈纶纳米纤维复合膜。该固定化酶的膜材料易于从反应体系中回收，可反复多次使用，提高酶的利用率和降低生产成本等优点，并且其制备过程简单。