本发明技术介绍了一种从恶性肿瘤细胞糖蛋白标志物中分离其标志性N－连接寡糖链，用于免疫小鼠，筛选制备针对肿瘤标志性N－连接寡糖链的单克隆抗体的制备方法，以及制备的N－连接寡糖链单克隆抗体在恶性肿瘤临床诊断和治疗的应用技术。本项技术的主要特点是通过酶解的方法分离纯化恶性肿瘤标志性N－连接糖链，并对其进行氨基吡啶化处理，提高其免疫原性，然后接种小鼠，筛选和制备恶性肿瘤标志性糖链的抗体。采用盐析法和(或)亲和层析法制备并纯化单克隆抗体。制备的单克隆抗体可作为恶性肿瘤的免疫学诊断及其与良性肿瘤和其他疾病的鉴别诊断的主要材料，也可用于体内外对恶性肿瘤细胞和组织进行标记示踪及恶性肿瘤靶向性药物治疗的材料。