本实用新型涉及一种培养皿，特别是一种皿盖内设有内圈的一次性使用无菌双层培养皿，其由皿盖和皿底组成，所述皿盖为圆柱形，其中央设有内圈，内圈为圆台形，内圈边缘与皿盖上板面成一定角度；皿盖内等三角均布有三个一字形凸愣；皿底为圆柱形，皿底的外径小于皿盖外圈的内径，培养细菌时，皿盖盖在皿底上面。本培养皿使用成本低，减少了包装和孵箱内的存放空间，降低了费用，双层培养皿虽然结构简单，但其应用普遍，具有一定经济效益和社会效益。