本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种亚洲I型口蹄疫病毒多肽制备四聚体的方法。本发明针对设计的口蹄疫病毒多肽，将采用ELISPOT和构建四聚体两种方法筛选和鉴定口蹄疫病毒多肽，构建荷包猪SLA‑2重链四聚体，并在原核表达系统pET‑21a(+)/BL21进行了表达，包涵体提取；口蹄疫病毒多肽，通过ELISPOT方法筛选具有引起特异性CTL反应的多肽，然后将多肽与SLA‑2重链、已有的轻链β2m进行复性、生物素化以及与FITC标记链霉亲和素反应生成SLA‑2‑BSP/肽四聚体，然后通过流式细胞术检测四聚体的功能。本发明通过ELISPOT方法鉴定得到了猪亚洲I型口蹄疫病毒VP1的一条特异性多肽表位，并成功构建了肽四聚体，检测了其特异性CTL，初步建立了猪四聚体技术平台，为研究猪特异性CTL免疫应答以及T表位筛选奠定基础。