本发明提供了一种木香对照提取物及其制备方法和应用，包括分别对多批木香药材粉末进行多次提取，得到不同批次的木香提取物，然后对不同批次的木香提取物进行调配，得到木香对照提取物。本发明的木香对照提取物的制备方法操作简便、成本低、重复性好且提取率高；用此制备方法制备木香对照提取物，保证了不同批次的木香对照提取物的一致性，而且其性状稳定、均匀且便于使用；采用本发明的木香对照提取物的制备方法最终得到的对照提取物中木香烃内酯和去氢木香内酯总含量不得低于3.5％且不高于9.0％，含水量不高于5.0％；且对照提取物薄层色谱指纹图谱、HPLC指纹图谱与正品木香药材对应一致。