本发明公开了一种近红外抗生素荧光探针检测试剂、其制备方法与应用。所述近红外抗生素荧光探针检测试剂包括荧光纳米材料，所述荧光纳米材料的激发光谱与抗生素的吸收光谱有至少部分重叠，使得所述荧光纳米材料的激发波长被抗生素吸收，导致所述荧光纳米材料的荧光淬灭。本发明利用近红外碳量子点等荧光纳米材料和抗生素之间形成的内滤效应的原理而构建一种高选择性高检测灵敏度简单可行的检测四环素类和喹诺酮类抗生素的荧光纳米探针试剂，提高荧光纳米探针的选择性，可解决现有抗生素检测探针灵敏度不够、检测过程复杂的技术难题，在实际样品中的检测成效显著，有助于设计成传感器用于实际样品中抗生素的现场检测。