本发明涉及肌醇的酶催化制备领域，具体的说是一种纤维素完全磷酸解生产肌醇的酶法制备方法。本发明所公开的肌醇的制备方法是以预处理过的纤维素(主要成分为纤维多糖)为酶催化反应的底物；采用纤维多糖磷酸化酶、纤维二糖磷酸化酶、聚磷酸葡萄糖激酶、葡萄糖磷酸变位酶、肌醇‑1‑磷酸合成酶和肌醇单磷酸酶催化纤维多糖完全磷酸解转化为肌醇。通过优化多酶反应过程，分阶段控制反应过程温度，显著提升底物的转化效率和肌醇的产率，缩短了反应时间。该技术方法实现了纤维素底物的完全磷酸解，还可以用于其他体外多酶反应体系催化纤维多糖产氢气、产电或生产其他生物基化学品。