本发明公开了一种强化自噬的脐带间充质干细胞（UCMSCs）条件培养基的制备及应用，属于间充质干细胞应用技术领域。本发明利用雷帕霉素诱导UCMSCs自噬，而后制备强化自噬的UCMSCs条件培养基，并通过脐静脉内皮细胞成管实验筛选促血管生成效果最好的条件培养基，通过体内外实验比较强化自噬的UCMSCs条件培养基与未诱导自噬的UCMSCs条件培养基的促血管生成效应。实验结果表明：与对照组相比，各组条件培养基均具有促血管生成效应，其中以100nM雷帕霉素强化自噬的UCMSCs条件培养基促血管生成效应最为明显，其效果明显优于未诱导自噬UCMSCs条件培养基。本发明的制备工艺过程简单且成本低廉，实验结果表明制得的强化自噬的UCMSCs条件培养基可有效促进体内外新生血管的生成。