本发明涉及血浆中污染物测定技术领域，具体是涉及一种测定血浆中有机磷酸酯的磷酸二酯代谢物含量的方法。本发明利用高效液相色谱‑离子肼‑三重四级杆质谱联用技术结合液液萃取和自制固相小柱萃取检测血浆中磷酸二乙酯、磷酸二正丁酯和磷酸二苯酯含量的方法。血浆样品经液液萃取和固相萃取净化，用高效液相色谱‑质谱联用仪MRM监测离子模式分析，外标法定量。本发明的方法检出限低，稳定性好，回收率高，检测灵敏度高，用于人血浆中磷酸二乙酯、磷酸二正丁酯和磷酸二苯酯含量的测定，能够满足人血浆中目标物残留的检测要求。