本发明公开了一种合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母的构建方法及其菌株；采用解脂耶氏酵母为合成底盘，通过代谢工程改良手段，对该酵母进行基因剪接，引入由葡萄糖、果糖、甘油、淀粉为碳源合成木糖醇的基因，阻断合成副产物的代谢途径，从而使得重组的解脂耶氏酵母能由葡萄糖、果糖、甘油、淀粉为碳源，发酵合成木糖醇，得到由葡萄糖等碳源合成木糖醇的工程菌株。发酵后，通过菌液分离，澄清的发酵液进行离子交换、脱色、浓缩、结晶等工艺得到木糖醇结晶。本发明描述的由葡萄糖等碳源合成木糖醇的工程酵母菌的构建方法以及采用该方法获得的由葡萄糖等碳源合成木糖醇的解脂耶氏酵母菌株，能够简化现有的化学合成木糖醇的方法，具有较好的应用价值。