本实用新型公开一种促黄体生成素定量多层对照检测试纸盒，包括盒体和微孔盒，盒体的四个内侧壁上设有试纸槽，试纸槽之间形成空腔，空腔的中部设有微孔盒，盒体包括测试区、进液区和对照区，对照区位于进液区的上方，进液区位于测试区的上方，测试区的上方侧面、进液区的和对照区的连接处通过固定盘连接，进液区和对照区的左右侧面设有进液口，进液口内设有单向软膜，对照区的内侧嵌装有圆形贯通管，圆形贯通管位于进液口之间，进液区的内侧嵌装有方形贯通管，方形贯通管位于进液区之间。能够同时进行四组测试，而不会因为时间的差异造成实验结果的不同，相比较传统的逐条进行测试更为精确，也减少了环境因素和人为因素对实验结果的影响。