本实用新型提供一种酶联免疫检测试剂盒，试剂盒内包括瓶体限位器、若干试剂瓶、瓶盖海绵层、酶标板分隔层、酶标板、操作说明书。上述试剂盒的瓶体限位器有温度计开口，可将温度计插入瓶体限位器，使得试剂盒内温度可以使用温度计进行监测。上述试剂盒的酶标板分隔层，在试剂盒内可以收纳酶标板，防止酶标板移动，同时，在进行检测操作时，可以用酶标板分隔层反向盖住酶标板，以达到酶标板反应过程的避光需求。上述瓶盖海绵层，根据试剂瓶瓶盖位置及高度进行开孔，使其能够将瓶盖完整罩住，且内部设有白色吸水纸，一方面可以加强试剂盒内试剂瓶的固定，两一方面，若试剂瓶发生试剂泄漏，可以及时吸收漏液并使操作者及时发现漏液问题。