本实用新型公开了一种耐热大肠菌群检测试剂盒，包括盒体，所述盒体的上端面合页连接有盒盖，所述盒盖的正面侧壁上固定安装有拉环，所述盒体的上端面对称开设有两个凹槽，每个所述槽体内均放置有测试槽体，每个所述测试槽体内均放置有大肠杆菌大肠菌群测试板，所述盒体内横向开设有转动腔，所述转动腔的下端面等距的开设有四个弹簧槽，每个所述弹簧槽内均滑动连接有齿板，每个所述齿板的上端面均贯穿凹槽的底端面并与测试槽体的底端面相抵。本实用新型，试剂管内的溶液通过滴头滴入测试槽体内，含有耐热大肠菌样品溶液会逐渐浸入大肠杆菌大肠菌群测试板上进行测试，测试的过程中，盒盖处于密封状态，提高了测试的准确性。