本发明涉及生物医学工程领域，公开了一种用于消化道粘膜分层的可注射有色凝胶垫及其应用。本发明通过先在消化道粘膜下层注射丝素蛋白溶液、壳聚糖溶液或明胶溶液，然后再注射含有磷酸甘油二钠的京尼平溶液，发生交联反应后在消化道粘膜下层形成凝胶垫，用于将病变粘膜层与肌肉层分离，方便病变粘膜层剥离。本发明可通过控制京尼平溶液中京尼平和磷酸甘油二钠的用量控制凝胶垫的形成时间。本发明中所采用的材料均为低细胞毒性、高度生物相容性的液体材料，且形成的凝胶垫为深蓝色，能够清晰的标出病变组织，使粘膜剥离术更加方便安全，具有很好的临床使用效果，值得临床推广。