一种温敏型鹿茸软骨基质水凝胶材料的制备方法及应用。本发明属于组织工程技术领域。本发明为解决目前针对鹿茸软骨的脱细胞基质材料存在细胞脱除不完全的技术问题。方法：将鹿茸去血、去皮后浸泡于含抑肽酶的PBS缓冲液中，然后置于密闭加压装置中加压处理，切片、研磨后和冻融缓冲液混合于金属密闭容器中孵育，液氮急冻、解冻后，再依次经胰蛋白酶消化液、EDTA去污剂、核酸清除剂、除菌剂处理，真空冷冻干燥后经胃蛋白酶消化液消化，得到温敏型鹿茸软骨基质水凝胶。本发明的处理方法相比现有鹿茸软骨脱细胞处理方法具有更好的细胞脱除效果，脱细胞处理未对胞外基质成分造成严重损失，脱细胞后的基质材料空隙均匀，血管管腔结构依然保留。