本发明属于抗药性检测技术领域，公开了一种快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法，所述快速鉴定草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗药性的方法包括进行草地贪夜蛾的饲养；对草地贪夜蛾进行双酰胺类杀虫剂溶液的滴加；检查草地贪夜蛾死亡状态和死亡数量；采用Polo Plus 2.0软件进行分析，进行草地贪夜蛾基因的相对表达量测定，得到相对表达量在抗性种群中表达量最高的基因。本发明通过对草地贪夜蛾的室内持续饲养实现对其敏感性与活性的维持，鉴定结果更准确；对草地贪夜蛾施加双酰胺类杀虫剂溶液时直接滴加在虫体上，分布更均匀，提高了抗性监测结果的准确性。通过PCR检测判断草地贪夜蛾对双酰胺类杀虫剂抗性水平，灵敏度高、稳定性好、检测周期短。