本发明属于污水处理技术领域，具体涉及一种油田高分子杀菌絮凝剂及其制备方法与应用。所述的制备方法包括以下步骤：在助溶剂A和碱液存在的条件下，脂肪仲胺和氯代烯烃发生第一步取代反应生成叔胺，其次与氯烷基苯磺酸钠发生第二步取代反应生成季铵盐；在助溶剂B、缓冲盐和引发剂存在的条件下，将步骤(2)生成的季铵盐发生聚合反应得到杀菌絮凝剂。基于1摩尔份的脂肪仲胺，氯代烯烃、氯烷基苯磺酸钠的用量分别为0.7‑1.3摩尔份、0.8‑1.2摩尔份。该杀菌絮凝剂具有合成工艺简单、成本低廉、没有二次污染的特点，并且具有杀菌絮凝二合一的功能。对硫酸盐还原菌的杀菌率达到99％以上，对含油污水的悬浮物去除率达80％以上。