本发明属于药物检测技术领域，具体公开了一种用于体液中抗癌药物检测的试纸盒及其制备和使用方法。本发明提供了试纸盒包括试纸和检测盒，试纸包括纸尖以及与纸尖连接的尾芯，纸尖沉积金属纳米材料作为SERS基底，用以增强拉曼散射的信号，试纸盒包括进样器和盒体，盒体设置有用于放置试纸的斜坡和用于放置进样器的空腔，所述斜坡连通，试纸的纸尖放置在斜坡上，尾芯正好置于所述进样器的下方；本发明制作简单，成本低廉，无需笨重设备和无菌条件，并且制作出的这种试纸盒体积小、结构紧凑，便于携带，并且试纸盒的在使用过程中耗时短，操作方便、简单，促进了SERS检测的标准化和一体化，此方法还可以使药物的预浓缩效果明显提高，检测灵敏度高。