本发明公开了一种快速检测ROS1基因重排探针、FISH试剂盒以及方法。本发明所获得的快速检测ROS1基因重排探针，包括dcas9蛋白和sgRNA，dcas9蛋白由绿色或者红色荧光染料标记，sgRNA分为第一组sgRNA和第二组sgRNA，第一组sgRNA包括17条sgRNA，第一组sgRNA在ROS1基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.17所示，第二组sgRNA包括17条sgRNA，第二组sgRNA在ROS1基因上的靶向位点序列如序列表SEQ ID NO.18‑SEQ ID NO.34所示。本发明提供的快速检测ROS1基因重排FISH试剂盒采用dCas9介导的FISH技术利用CRISPR系统进行DNA快速杂交，具有检测时间短（约1小时），准确性高，特异性好、假阳性低、操作条件温和（室温和37°C，可更好地维持细胞形态和DNA结构）、操作简便灵活、成本低等优点。