本发明提出了一种高效的桃巴旦茎段无菌外植体的培育方法及外植体，包括以下步骤，外植体材料选择，于4月至6月田间从生长健壮、无病虫害的巴旦木母株上选取腋芽饱满、半木质化、一年生的枝条作为外植体材料，外植体预处理，使用消毒剂对枝条进行第一次消毒处理，将枝条剪成每段含有留3‑5个腋芽或顶芽的小段备用，外植体消毒处理，使用消毒剂对枝条小段进行第二次消毒处理，以清除外植体表面细菌、真菌等微生物，防止材料的污染，外植体接种，外植体初始芽诱导；明确了5月中旬至6月初的时间段为外植体采集时间，有效地降低了外植体的带菌量，并通过外植体预处理方法、次氯酸钠杀菌方法及时间等结合，大幅提高了消毒灭菌的效果。