本实用新型公开了一种定位多孔板在显微镜载物台的夹具，包括底板和设置在底板上的凸柱、第一定位夹以及第二定位夹，所述的第一定位夹和第二定位夹位于所夹持多孔板对角线的位置，其连线的长度与多孔板对角线的长度相同，所述的凸柱的中心点与所述第一定位夹和所述第二定位夹所夹持的矩形区域的中心点的位置重合；沿着所述的底板的任一边长设置矩形的开口槽，所述开口槽与载物台上的夹柱相匹配。本实用新型中的夹具的结构简单，通过结合载物台本身的结构，能够稳固的将多孔板固定在载物台上，限制其在三维空间中任一方向上的移动，确保显微镜下的孔板均在同一位置，大大提高了这种夹具的实用性。