本实用新型公开了一种一体式贴壁细胞培养分离装置，包括箱体、细胞培养单元、按压机械手、抓取机械手、加液器、吹打机构和传送带；箱体包括培养腔、吹打腔和取样腔；按压机械手用以将盒、盒体和/或盖体之间卡扣连接或分离；抓取机械手用于抓取底盒和/或盒体转移至吹打腔；加液器用于为细胞培养单元提供细胞培养液；吹打机构用于对底盒和/或盒体内培养完成的细胞进行吹打分离；传送带用于将经吹打机构分离处理后的底盒和/或盒体传送至取样腔。本实用新型的一体式贴壁细胞培养分离装置，通过将功能单元集成为一个整体，结构设计新颖，操作简单方便，有效防止了细菌、病毒等的侵入，且生产一致性高，可控性强，保证了生产效率。