本实用新型公开了一种单克隆抗体蛋白纯化用柱层析装置，包括提纯罐，提纯罐的一侧设有第一进液管，第一进液管上设有泵体，提纯罐的内侧设有第一层析柱和第二层析柱，第一进液管与第一层析柱的中部连通，第一层析柱的上部一侧设有伸出提纯罐的第一排液管。本实用新型中，将第一进液管的出液端连接在第一层析柱的中部，待提纯液进入第一层析柱中后，通过第一渗析层的物质进入第二进液管，不能通过第一渗析层的物质逐渐累积后通过第一排液管排出，从而维持第一层析柱内部的不能渗析物的浓度在一定范围内，同样通过第二进液管进入到第二层析柱中的物质重复上述步骤，通过第二渗析层的物质最终进入外部的蛋白质检测装置中进行检测。