本实用新型公开了一种探针卡定位机构，包括底座、开槽和支撑套，所述底座内开设有开槽，开槽的开口处安装有支撑套，且支撑套的上下两端焊接开槽的内壁，所述支撑套内插装有驱动轴，驱动轴转动连接支撑套，驱动轴位于底座外侧的端口处焊接有旋钮，所述底座的一侧安装有限位管，且限位管的截面呈长方形结构，限位管贯穿底座，限位管内插装有上齿条，在弹簧的作用下，利用夹板将探针卡固定，橡胶垫和弹簧在固定时起到缓冲的作用，防止探针卡受到挤压而损坏，需要取下探针卡时，只需向下挤压探针卡的两边，在逆时针转动旋钮即可将探针卡取出，本探针卡定位机构结构简单，操作方便，便于探针卡的固定使用。