本实用新型公开了一种微生物培养使用的分离装置，包括支撑架和分离机构，连接杆的上端与连接圈的下端固定连接，连接杆的下端与放置盘的上端四角通过螺钉固定连接，结构设计简单，稳定效果好，便于放置，两根第一分流管与两根第二分流管均关于主管中心对称，且第一分流管、第二分流管和第三分流管的孔径相同，保证每个培养皿中分到的微生物原液相同，第一分液副管和第二分液副管均呈锥形状，使得液体出液时缓慢，锥形状的第一分液副管和第二分液副管的锥头出液口向下垂直延长线与培养皿放置槽的中心相交，使得流出的微生物原液从培养皿中部向两侧扩散，便于培养，放置盘的上端依次开设有培养皿放置槽，保证微生物原液分液时的平铺稳定。