本实用新型公开了一种一次性防倒吸流动相抽滤装置，包括抽滤量杯、连接套管和内置螺纹口旋盖，所述抽滤量杯外表面上印制有刻度，抽滤量杯内部设置有过滤膜，所述连接套管侧面上设置有抽滤口，连接套管底端与内置螺纹口旋盖连接固定在一起，连接套管内部安装设置有插接座，所述抽滤口通过软管与真空泵相连，所述出液管穿过插接座进入内置螺纹口旋盖内，所述内置螺纹口旋盖内壁上设置有内螺纹，内置螺纹口旋盖通过内螺纹与流动相瓶螺接在一起。该一次性防倒吸流动相抽滤装置，结构设置合理，一次性防倒吸流动相抽滤装置，每次用完直接抛弃，不重复使用，避免交叉污染，解决了每次更换不同流动相时需要清洗装置的问题。