本发明涉及一种体外制造抗原特异性T淋巴细胞(CellTrAg)的新方法，该细胞用细胞内燃料标记并在载有抗原的单核细胞的存在下扩增，随后基于低强度的细胞内染料进行分类，其中低强度荧光是抗原特异性的标志，因为荧光损失与增殖强度相关。在功能测试中评估抗原特异性，该功能测试中基于低荧光而分选的抗原特异性淋巴细胞在分选过程中比具有高荧光的非特异性淋巴细胞更具活性；在调节性T淋巴细胞的情况下，活性被定义为抑制效应性淋巴细胞功能，而在效应性T淋巴细胞的情况下，活性被定义为增强这些细胞的特征，比如增殖、细胞因子和细胞毒性因子的产生。