本发明属于西瓜育种技术领域，具体涉及一种利用EMS诱变创制西瓜突变体的方法。方法包括采集充分开放的雄花花药、花药与EMS‑石蜡油溶液充分搅拌后获得EMS处理过的花粉、蘸取花粉授粉当日开放的雌花、用适宜浓度座瓜灵均匀喷施EMS花粉授粉的雌花子房、收获并种植M0代种子、获得M1代变异丰富的西瓜EMS突变个体。通过本发明可以获得雄性不育、矮化、四倍体、叶片畸形等多种突变体，有效解决西瓜功能基因研究和品种选育中存在的遗传背景狭窄、遗传变异少、优异种质匮乏、种质创制效率低等技术瓶颈，从而用于构建西瓜突变体库，便于功能基因研究，可极大推动西瓜优异基因挖掘和应用，为优异新品种选育提供材料支撑。