本发明公开了一种定量检测脂肪酶LPS的试剂盒，其包括试剂R1以及试剂R2，所述试剂R1中包括缓冲液、表面活性剂1以及表面活性剂2；所述试剂R2中包括缓冲液、共脂肪酶、1，2‑邻‑二月桂宗甘油‑3‑戊二酸‑(6‑甲基试卤灵)‑酯、表面活性剂3、表面活性剂4以及蛋白。本发明通过在试剂R1中添加表面活性剂1以及表面活性剂2，同时在试剂R2中添加表面活性剂3、表面活性剂4以及蛋白的组合方式，一方面显著提升了试剂盒的检测性能，包括检测精密度以及线性范围等指标，另一方面避免了在试剂中引入胆酸盐类似物，最大程度的降低了不同检测项目间的交叉污染，保证了后续检测项目的检测准确性。