本发明涉及线虫保存技术领域，具体涉及一种扩散型3龄松材线虫的低温保存方法。本发明提供的扩散型3龄松材线虫的低温保存方法包括采用氯化钾溶液处理扩散型3龄松材线虫，再进行低温保存的步骤。本发明针对扩散型3龄松材线虫提供适宜的低温保存方法，该方法先对扩散型3龄松材线虫进行渗透脱水处理，再进行低温保存，显著提高了扩散型3龄松材线虫在低温保存过程中的存活率；经低温保存的扩散型3龄松材线虫只需经过复水处理即可复活，经过常规培养后即可转化为繁殖型松材线虫。该保存方法不需要使用冷冻保护剂，不依赖复杂的程序性降温方法，具有操作简单、成本低廉的优势，适于推广应用。