本发明涉及酶免疫技术领域，具体涉及一种肌红蛋白抗体‑酶标记物及其制备与应用。所述肌红蛋白抗体‑酶标记物，由马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ和巯基修饰的酶标记物交联得到；所述马来酰亚胺修饰的肌红蛋白抗体MBⅡ由6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯作为交联剂，与肌红蛋白抗体交联制成；所述巯基修饰的酶标记物是以N‑琥珀酰亚胺S‑乙酰硫代乙酸盐作为交联剂，与碱性磷酸酶交联后经盐酸羟胺活化制成。本发明的肌红蛋白抗体‑酶标记物经过稀释液稀释后用于酶促化学发光免疫检测时，和普通抗体‑酶标记物相比，其本底值低3~5倍，高值信号与低值信号比值高3倍以上。