本发明属于细胞培养负载材料技术领域，具体涉及一种可耐高温灭菌的PET细胞载体的制备方法及其应用，本发明首先利用热处理工艺使PET结晶充分，再经溶液氧化法附着高吸附性的聚多巴胺颗粒，最后使用京尼平作为偶联剂固定明胶大分子后制备得到一种PET细胞载体。该载体具备良好的热稳定性，可耐受常规高温高压灭菌且保持良好的机械性能和细胞相容性；同时，该载体具有疏松多孔结构，可为细胞提供三维的生长空间，可容纳大量细胞生长，在各类常用的培养装置中均可使用，尤其适合在必须整体封装高温灭菌的大型生物反应器中，作为支持细胞生长的固定床填料使用；此外，本发明制备工艺简单，使用简单灵活，适用性广。