本发明属于生物技术领域，公开了一种细胞保存液及其制备方法与应用。所述细胞保存液包括醇、酸、缓冲盐、离子强度维持剂、抗氧化剂和蛋白水解酶；所述细胞保存液通过添加蛋白水解酶，可以较好地处理多粘液和血细胞的样本，提高薄层液基细胞学检测的染色效果；但是蛋白水解酶会影响还原兰组织细胞染色效果，通过添加抗氧化剂，降低了蛋白水解酶对还原兰组织细胞染色的影响，同时，提高了免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色的准确性和稳定性，并且，所述细胞保存液保存细胞样本后对HPV检测的准确性和稳定性无影响。即所述细胞保存液能同时满足薄层液基细胞学检测、HPV检测、免疫细胞化学染色和还原兰组织细胞染色四种筛查方法。